文章摘要:作为新型的基因组编辑工具，碱基编辑技术结合了CRISPR/Cas系统的定位功能和碱基脱氨酶的编辑功能，可实现特定位点的碱基突变，具有不产生双链DNA断裂，无需外源模板且不依赖染色体DNA同源重组的优势。目前，研究者们已在重要的工业生产菌株谷氨酸棒杆菌中开发多种碱基编辑工具，并实现了两基因和三基因的同时编辑。文中针对谷氨酸棒杆菌中基于CRISPR/Cas9的多位点碱基编辑系统中存在的不足（多重sgRNA结构烦琐、重复序列干扰、更换靶点困难等），采用多种策略进行优化，并比较碱基编辑效率：首先优化基于单独启动子/终止子的多重sgRNA表达框，通过构建框架质粒，并结合Golden Gate连接方法，加速靶点更换，避免重复序列干扰，虽然该方法 sgRNA结构烦琐，但编辑效率最高；同时，开发基于TypeⅡCRISPR crRNA阵列、tRNA加工的多重gRNA表达框，这两种形式均只需要一个启动子和一个终止子序列，极大地简化了表达框结构，虽然编辑效率均出现下降，但仍具有一定的实用性。该研究丰富了谷氨酸棒杆菌的基因组编辑工具，为该菌株的遗传改造提供了更多的技术支持。

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项目基金:《化学与生物工程》 网址: http://www.hxyswgc.cn/qikandaodu/2021/1228/1229.html